R1000 RNA Transfection Reagent

R1000 RNA Transfection Reagent

產品簡介：

R1000 RNA Transfection Reagent是一種獨有的RNAi特異性陽離子脂質體轉染試劑，本品推薦用于將siRNA、microRNA(miRNA)、mimic、inhibitor 等小片斷RNA 轉染入動物細胞（包括各種細胞系、原代細胞、懸浮細胞、昆蟲細胞等）。本產品可以常溫運輸，在多種細胞系的驗證中均表現了很好的RNA 轉染效率，并有很低的細胞毒性。

產品特點：

1.超高的轉染效率，且所需RNAi 濃度低，基因抑制效果更好，非特異性效應極少

2.針對miRNA 拮抗劑和模擬物具有出色的轉染效率

3.細胞毒性低、易于優化

4.可用于多種細胞類型

5.簡單、高通量的即用型轉染

使用方法：

(不同的細胞已及轉不同面積的孔板操作起來略有不同，以24 孔板siRNA 轉染為例)。

1.提前一天細胞種植

貼壁細胞：提前一天將細胞種植在24 孔板中，以轉染時細胞匯合度在30％左右為宜，轉染前全培養基總量為0.45ml。

懸浮細胞：采用對數生長期的細胞，數量為常規培養細胞數的1/3 進行轉染實驗。

2.轉染過程

⑴取0.67ug(50pmol)的siRNA，加入無血清稀釋液，充分混勻，制成RNA稀釋液，終體積為25μl。

注意：無血清稀釋液建議采用OPTI-MEM、無血清DMEM 或1640。

⑵取1ul 的R100，然后加入24ul 無血清稀釋液體，充分混勻，制成R100 稀釋液，終體積為25μl。室溫靜置5 分鐘。

⑶將R100 稀釋液和RNA 稀釋液充分混合（可用振蕩器振蕩或用加樣器吹吸10 次以上）混合，室溫靜置15 分鐘。轉染復合物制備完成。

⑷將50μl 轉染復合物滴加到有0.45ml 全培養基（可含10%血清和抗生素）的細胞上，混合均勻。

⑸轉染后6 小時觀察細胞狀態，如狀態良好可不必更換培養基，繼續培養24-96小時得到結果。

注意：

1.siRNA 轉染后，繼續培養24-72 小時在mRNA 水平得到結果，繼續培養24-96 小時在蛋白水平得到結果。mRNA 轉染后，根據需要在24 小時后得到結果。

2.由于血清和培養條件等差異，轉染后鏡下培養基中可能出現少量黑點狀沉淀，為轉染試劑和血清中蛋白結合產物，不影響轉染結果和細胞狀態，可通過換液除去。

不同細胞培養容器轉染推薦用量

3.優化

由于RNA 序列差異、合成條件不同以及是否帶有熒光等標記，決定了RNA 和轉染試劑在不同情況下會有不同的最佳條件，建議先進行預實驗優化。

RNA 濃度和轉染試劑量的優化(24well)

                    此方案僅供參考

根據優化實驗結果，固定RNA(μg):轉染試劑量(μl)的比值，按培養器皿表面積比例應用到其他培養容器。

包裝規格：

保存溫度:

冰袋或者濕冰運輸，短時間內可室溫運輸，但需避免光源熱源，長時間儲存于4℃，切勿凍存。