R300脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑

  產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

  增強(qiáng)型轉(zhuǎn)染試劑是在前幾代轉(zhuǎn)染試劑的基礎(chǔ)上再次創(chuàng)新，包含最為先進(jìn)的脂質(zhì)體納米顆粒技術(shù)，追求更優(yōu)越的轉(zhuǎn)染性能。增強(qiáng)型轉(zhuǎn)染試劑具有更好的轉(zhuǎn)染效率，并提高細(xì)胞活性，適用于較難轉(zhuǎn)染及常見(jiàn)細(xì)胞的轉(zhuǎn)染。

  產(chǎn)品特點(diǎn)：

  1. 更為優(yōu)越的轉(zhuǎn)染性能，為較難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞系提供了較高的轉(zhuǎn)染效率;

  2. 對(duì)細(xì)胞更為溫和，毒性更低;

  3 .較其他轉(zhuǎn)染試劑具有更高的轉(zhuǎn)染效率且用量低;

  4.適用細(xì)胞更為廣泛。

  操作步驟：(以六孔板的貼壁細(xì)胞DNA轉(zhuǎn)染為例)

  1. 細(xì)胞準(zhǔn)備。轉(zhuǎn)染前一天將細(xì)胞接種至六孔板內(nèi)，細(xì)胞接種數(shù)量視其生長(zhǎng)速度和細(xì) 6 胞系類型而定，一般為0.5-1×10 個(gè)細(xì)胞。轉(zhuǎn)染時(shí)要求細(xì)胞生長(zhǎng)的匯合度為70~90%，轉(zhuǎn) 染前兩小時(shí)對(duì)細(xì)胞進(jìn)行換液。(細(xì)胞狀態(tài)與轉(zhuǎn)染效果影響很大，選擇最佳的細(xì)胞狀態(tài)更有利于轉(zhuǎn)染效率提高和轉(zhuǎn)染后細(xì)胞狀態(tài)的恢復(fù));

  2. 將3.75μl和7.5μl的R300-Lipo增強(qiáng)轉(zhuǎn)染試劑分別加至另外125μl無(wú)血清的OPTI-MEM培養(yǎng)基中，輕輕混勻，室溫靜置2-3分鐘;

  3. 將5μg質(zhì)粒DNA (0.5-5μg/μL) 加入到250μl無(wú)血清OPTI-MEM培養(yǎng)基稀釋，制備DNA 預(yù)混液勻，然后添加10 μl RZ523-Lipo輔助試劑并充分混勻;

  4. 在每管已稀釋的R300-Lipo增強(qiáng)轉(zhuǎn)染試劑中加入等體積稀釋的 DNA孵育10-15分鐘;

  5.將DNA和R300-Lipo增強(qiáng)轉(zhuǎn)染試劑混合液滴加至六孔板的孔內(nèi)，前后左右晃動(dòng)孔板混勻，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng);

  6.轉(zhuǎn)染18-48小時(shí)后，倒置熒光顯微鏡下觀察熒光蛋白表達(dá)，或加入抗性培養(yǎng)基篩選穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞系單克隆。

  用量參照表：

  1. 轉(zhuǎn)染siRNA至細(xì)胞時(shí)，遵循如上所述的DNA實(shí)驗(yàn)方案，但在稀釋siRNA 時(shí)不要加入R300輔助試劑。在無(wú)血清培養(yǎng)基中制備 DNA-R300-Lipo增強(qiáng)轉(zhuǎn)染試劑復(fù)合物，直接將其加入含細(xì)胞培養(yǎng)基的細(xì)胞中(有無(wú)血清或抗生素均可);

  2. 轉(zhuǎn)染后無(wú)需去除轉(zhuǎn)染復(fù)合物或者更換/添加培養(yǎng);

  3. 整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程避免細(xì)胞污染，由于不同細(xì)胞耐受性不同，我們建議您在做批量實(shí)驗(yàn)前，可根據(jù)實(shí)際質(zhì)粒和細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率，分不同梯度量先做預(yù)實(shí)驗(yàn)，摸索最佳DNA和R300-Lipo增強(qiáng)轉(zhuǎn)染試劑的混合比例。步驟里面測(cè)試推薦的兩種濃度的并非固定濃度，優(yōu)化后可根據(jù)自身細(xì)胞情況調(diào)整用量。